關于病毒采樣管生產與使用的幾點思考

       病原體采心血管一種社區醫療健身器械品牌，在國內生孩子客戶幾乎都在決定這這類品牌合同備案申請的，決定這類品牌登陸的客戶不怎么，要想無法上海等地的緊急救援需求分析，有眾多客戶都在走“緊急救援入口”公司申請的這這類合同備案申請許證。病原體采集管由采集拭子、病原體存為液和項目的產品包裝機等包含。基于沒有保持一致的我國標或制造行業標，各生孩子公司的品牌文化差異非常大的。

       1、采樣拭子：采樣拭子直接接觸采樣部位，其采樣頭的材質與后續的檢測關系密切。采樣拭子頭應該采用Polyester(PE)合成纖維或Rayon(人造纖維)制成，不能使用海藻酸鈣海綿或木棒拭子(包括竹簽)，拭子頭部的材料也不能為棉花制品，因為棉花的纖維對蛋白質的吸附較強，不易洗脫到后續的保存液中；而含有海藻酸鈣和木制成分的木棒或竹簽折斷后浸泡在保存液中也會吸附蛋白，甚至會對后續的PCR反應有制止作用。制造拭子頭的材料推薦使用PE纖維、聚酯纖維、聚丙烯纖維等合成纖維，不推薦棉花等天然纖維，也不推薦尼龍類的纖維，因為尼龍類纖維(類似于牙刷刷頭)吸水性不佳，導致采樣量不足，影響檢出率。采樣拭子材料禁用海藻酸鈣海綿!拭子柄有折斷式、內置式兩種。折斷式拭子在采樣后放入保存管內從靠近采樣頭部位折斷后旋緊管蓋即可；內置式拭子在采樣后直接將采樣拭子放入保存管，將保存管管蓋內置的小孔對準手柄dingduan旋緊管蓋即可。兩種方式比較起來，后者相對安全。折斷式拭子在配合使用尺寸較小的保存管時，折斷時可能會導致管內液體外濺，應充分注意產品使用不當可能造成的污染風險。制造拭子柄的材料推薦使用空心聚苯乙烯(PS)擠出管或聚丙烯(PP)注塑壓痕管，無論使用何種材料都不能添加海藻酸鈣類助劑;不推薦使用木棒或竹簽。總之，采樣拭子應保證采樣量和釋放量，所選材料不能有影響后續檢測的物質。

       2、病毒保存液：市場上廣泛使用的病毒保存液主要有兩種，一種是以運送培養基為基礎改良的病毒維持液，另一種則為核酸提取裂解液改良的保存液。

前者的主要成分是Eagle's基礎培養液(MEM)或Hank's平衡鹽，添加了病毒生存所需的鹽類、氨基酸、維生素、葡萄糖以及蛋白質，這種保存液使用酚紅鈉鹽做為指示劑，溶液pH值在6.6-8.0時溶液呈粉紅色。保存液中添加了必須的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白質，蛋白質的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白，可以穩定病毒的蛋白質外殼。由于保存液營養成分豐富，有利于病毒的成活但是也有利于細菌的生長，如果保存液中污染了細菌，則會大量繁殖，其代謝產物中的二氧化碳會使保存液pH值下降，從粉紅色變為黃色。因而大多數廠家都在配方中添加了抑菌劑成分，推薦使用的抑菌劑為青霉素、鏈霉素、慶大霉素及多粘菌素B等，不推薦使用疊氮鈉、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(MCI)和 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)等，因為這些組分對PCR反應有影響。由于這種保存液提供的樣本基本是活病毒，可以大程度保持樣本的原始性，后續不僅可以用于病毒的核酸提取檢測，還能用于病毒的培養和分離。但是用于檢測時應該注意的是必須滅活以后再進行核酸提取純化。

       另一種以核酸提取裂解液為基礎配制的保存液，主要成分為平衡鹽類、EDTA螯合劑、胍鹽(如異硫氰酸胍、鹽酸胍等)、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)、陽離子表面活性劑(如十四烷基三甲基草酸銨)、苯酚、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇(DTT)、蛋白酶K等幾種或多種組分，這種保存液是直接裂解病毒釋放核酸，消除核酸分解酶(RNase)，如果僅用于RT-PCR較為合適，但裂解液可以滅活病毒，這種樣本不能用于病毒的培養分離。

病毒保存液使用的金屬離子螯合劑推薦使用EDTA鹽類(如乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸二鈉等)，不推薦使用肝素類(如肝素鈉、肝素鋰)，以免影響PCR檢測。

       3、保存管：制造保存管的材質應注意選擇，有資料提示聚丙烯(Polypropylene)與核酸的吸附有關，特別是在高張力離子濃度時，聚乙烯塑料(Polyethylene)比聚丙烯(Polypropylene)更容易抓住DNA/RNA。聚乙烯-丙烯聚合物(Polyallomer)塑膠與某些特殊處理的聚丙烯(Polypropylene)塑膠容器更適合做DNA/RNA的儲存使用。另外，在使用可折斷拭子時，保存管應盡量選擇高度大于8厘米的容器，以防止在折斷拭子時內容物外濺污染。

       4、生孩子手機截圖液的水：生孩子手機截圖液在安全使用的超注射用水應經途原子核量為13,000的反滲透膜膜凈化，以以確保去掉動物原因的匯聚物沉淀物，列舉RNase、DNase和內黑色素，不推建在安全使用普通型純化水或水蒸氣蒸溜水。